如何制备PDA培养基

怎样制作PDA培养基

PDA培养基，全称为马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potato Dextrose Agar Medium），是微生物学实验中常用的一种培养基，尤其适合用于酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌的培养。它属于固体培养基和半合成培养基，具有配制简便、营养丰富、价格低廉等优点。下面详细介绍如何制作PDA培养基。

一、所需材料和工具

1. 材料：

新鲜土豆：200克

葡萄糖：20克

琼脂：15\~20克（根据实际需要可稍做调整）

自来水或去离子水：1000毫升

（可选）磷酸二氢钾：3.0克

（可选）七水硫酸镁：1.5克

（可选）氯霉素或土霉素：0.2克/L培养基（用于抑制细菌生长）

2. 工具：

刀、裁纸刀

天平

电炉或电磁炉

锅（带盖）

烧杯（至少两个，容量分别为1000毫升和500毫升）

纱布（多层，用于过滤）

玻璃棒

试管或三角烧瓶

封口膜或棉塞

压力蒸汽灭菌器

麻绳或橡皮筋

牛皮纸

记号笔

二、制作步骤

1. 准备材料

清洗土豆：将土豆洗净，去除表面的泥土和杂质。

去皮和称量：用裁纸刀将土豆去皮，并用天平称取200克。

切块：将土豆切成小块，以便更容易煮烂。

2. 提取土豆汁液

锅中加水：在锅中加入1000毫升自来水或去离子水。

煮沸土豆：将切好的土豆块放入锅中，加热至沸腾，保持20\~30分钟，直到土豆能被玻璃棒轻易戳破。

过滤：用多层纱布（一般为8层）趁热过滤煮烂的土豆，将滤液收集到烧杯中。注意，滤渣要弃去。

3. 溶解琼脂和葡萄糖

补充水量：将滤液补充至1000毫升（如果蒸发导致液体减少）。

加热：将烧杯放在电炉或电磁炉上加热。

加入琼脂：将琼脂粉（15\~20克）逐渐加入烧杯中，并不断搅拌，防止糊底或溢出。

溶解琼脂：待琼脂完全溶解后，加入20克葡萄糖，继续搅拌均匀。

调整pH：PDA培养基一般不需要调pH，如需调整，可用pH试纸测定后用NaOH或HCl溶液逐滴调节至所需范围（通常为6±0.2）。

4. 分装培养基

分装：将配制好的培养基分装到试管或三角烧瓶中。固体培养基的分装量一般为试管高度的1/5（灭菌后制成斜面），三角烧瓶中的分装量不超过其容积的一半。

封口：使用封口膜、棉塞或泡沫塑料塞等封口，以防止外界微生物污染，并保证良好的通气性能。

标记：用记号笔在试管或三角烧瓶上注明培养基名称、配制日期等。

5. 灭菌处理

包扎：将全部试管或三角烧瓶用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞。

高压蒸汽灭菌：将捆好的试管或三角烧瓶放入高压蒸汽灭菌器中，在121℃、105kPa压力下灭菌15\~30分钟。

6. 无菌检查

冷却：将灭菌后的培养基冷却至室温。

培养：将冷却后的培养基放入25℃恒温培养箱内培养48小时，观察是否有杂菌生长。

保存：若培养基上无杂菌生长，则可以低温（如4℃）保存备用。

三、注意事项

1. 土豆处理：土豆在煮烂过程中可能会渗出淀粉，这些淀粉也要充分利用，无需去除。

2. 琼脂溶解：琼脂粉不要一次性全部倒入烧杯中，应待锅热时逐渐加入，并不断搅拌，以防止糊底。

3. 灭菌：灭菌是制作培养基的关键步骤之一，必须严格按照操作规程进行，以确保培养基的无菌状态。

4. pH调整：PDA培养基一般不需要调pH，但在某些特殊情况下，如需要培养对pH敏感的微生物时，可适当调整pH。

5. 保存：培养基在保存过程中应防止变干和污染，可以放入密封袋中保存于冰箱中。

四、制作变种

1. 添加无机盐

在PDA培养基的基础上，可以添加一些无机盐，如磷酸二氢钾和七水硫酸镁，以提供微生物生长所需的微量元素。这些无机盐的添加量一般为磷酸二氢钾3.0克、七水硫酸镁1.5克。

2. 添加抗生素

为了抑制细菌的生长，减少干扰性，可以在PDA培养基中加入一定量的抗生素，如氯霉素或土霉素。添加量为0.2克/L培养基。

3. 制作液体培养基

将PDA培养基中的琼脂去除，即可制成液体培养基。液体培养基适用于菌类的震荡培养等。

五、常见问题及解决方法

1. 培养基凝固不良：可能是由于琼脂溶解不完全或水分过多导致。解决方法是重新加热溶解琼脂，并调整水分含量。

2. 培养基污染：可能是由于灭菌不彻底或操作不当导致。解决方法是重新进行灭菌处理，并严格按照操作规程进行操作。

3. 培养基颜色变化：可能是由于葡萄糖氧化或微生物污染导致。解决方法是重新配制培养基，并进行无菌检查。

通过以上步骤和注意事项，你可以轻松制作出高质量的PDA培养基，为微生物学实验提供有力支持。